【摘 要】
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猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的
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猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病。该病可致各年龄猪只发生急性和慢性感染,发病率和死亡率常在20%以上,最急性型死亡率可高达80%～100%,慢性猪传染性膜肺炎潜伏于猪群内,可使猪只生长缓慢,平均日增重下降,饲养报酬降低。自1957年Pattison首次报道本病以来,该病在世界范围内广泛流行,给各国养猪业带来了严重的经济损失。由于APP对多种抗生素都易产生耐药性,所以疫苗接种是防制本病的主要措施。目前,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病,但由于APP血清型较多,灭活疫苗对不同血清型APP的交叉保护效果十分有限,因此筛选新型疫苗的保护性抗原的开发已经成为研究热点。本研究应用限制性内切酶Sau 3A I消化胸膜肺炎放线杆菌血清1型的基因组DNA,回收500 bp～3 000 bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamH I酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个克隆)。将该文库随机分为10个文库(10个Clone pool),分别提取每个文库的重组质粒免疫小鼠(n=160只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率和病理组织学变化2个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。初步筛选出2组保护率较高的两组,分别为3组和8组。之后分别将其分为4个表达亚文库(共8个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=120只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学和脾脏淋巴细胞转化试验4个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3-2和Clone pool8-1的免疫效果明显优于其他免疫组。本研究成功构建了胸膜肺炎放线杆菌血清1型的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定了基础。
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