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目的:1.本研究体外培养正常黏膜角化细胞(Human oral keratiocytes，HOK)和人舌鳞状细胞癌细胞（squamous cell carcinomas，SCC-9），分别与提取的人外周血中性粒细胞共培养。对比观测在口腔癌微环境中中性粒细胞氧化线粒体DNA(ox-mtDNA)是否升高及探究其升高原因。 2.我们通过观察裸鼠注射SCC-9细胞后组织及外周血中性粒细胞ox-mtDNA的水平，并与注射人正常组织细胞作比较，初步探讨采用检测外周血ox-mtDNA水平的方式，临床诊断早期口腔癌的可能性。 方法:1.采用transwell小室，人中性粒细胞分别与HOK细胞、SCC-9细胞体外共培养，并采用分别加入细胞因子白细胞介素-8（IL-8）和IL-8抑制剂姜黄素(curcumin)共培养，采用免疫荧光检测8-hydroxyl deoxyguanosine(8-OHdG)、Anti-Histone H3(citrulline R2+R8+R17)(H3cit)和DNA复合物检测ox-mtDNA，以及采用提取中性粒细胞外诱捕网(neutronphil extracellular traps，NET)上的ox-mtDNA，采用8-OHdG抗体，Elisa法检测ox-mtDNA在不同微环境的表达。 2.构建SCC-9裸鼠舌体移植瘤模型，同时在小鼠舌部注射人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGF）及(culture medium，DMEM)培养基作为正常对照组以及空白对照组。在48h以及72h收集各组舌部组织和72h收集外周血;采用HE染色观察中性粒细胞在组织中的浸润情况，并采用免疫荧光法检测中性粒细胞特异性抗体Ly6G，观测中性粒细胞在组织中的表达。此外，通过免疫荧光检测8-OHdG、H3cit和DNA复合物观测组织标本中ox-mtDNA的表达水平。进一步，通过提取各组裸鼠外周血中中性粒细胞mtDNA;采用8-OHdG Elisa法比较各组外周血中的ox-mtDNA的水平。 结果:1.免疫荧光分析发现中性粒细胞与SCC-9共培养比中性粒细胞与HOK细胞共培养ox-mtDNA表达升高。进一步通过在同样的共培养体系加入IL-8刺激后，ox-mtDNA的表达较无IL-8刺激组显著增加。另一方面，采用IL-8抑制剂curcumin预处理SCC-9细胞后，与中性粒细胞共培养，Elisa结果显示中性粒细胞释放的ox-mtDNA减少(P＜0.05);而IL-8抑制剂curcumin预处理HOK细胞后，与中性粒细胞共培养，Elisa结果显示中性粒细胞释放的ox-mtDNA未见明显变化(P＞0.05)。 2.在裸鼠注射SCC-9组，72h后其舌部注射区组织HE染色可以见到瘤块样改变，横纹肌排列紊乱，中性粒细胞浸润增多，浸润在SCC-9细胞微环境周围及中央;而注射HGF组的组织中可见横纹肌紊乱，少量中性粒细胞浸润;而注射DMEM组的组织中横纹肌排列有序，未见明显中性粒细胞浸润。 3.检测组织中的免疫荧光中性粒细胞特异性抗体Ly6G发现，在裸鼠注射SCC-9组中的中性粒细胞比裸鼠注射HGF组和裸鼠注射DMEM组增多。 4.免疫荧光检测8-OHdG、H3cit和DNA复合物检测发现在裸鼠注射SCC-9组的组织中可见中性粒细胞ox-mtDNA的表达明显高于对照组。进一步采用手术去除裸鼠SCC-9早期移植瘤72h后，组织中ox-mtDNA明显下降。而裸鼠注射HGF组和裸鼠注射DMEM组未见明显变化。 5.采用8-OHdG抗体Elisa结果显示ox-mtDNA在裸鼠注射SCC-9组的表达水平明显高于2个对照组(P＜0.01;P＜0.001)，而裸鼠注射DMEM组其ox-mtDNA水平小于裸鼠注射HGF组（P＜0.05）;进一步去除裸鼠SCC-9早期移植瘤72h后ox-mtDNA水平明显低于术前(P＜0.001)。 结论:SCC-9释放的IL-8可诱导中性粒细胞释放ox-mtDNA增多;早期口腔癌微环境的存在，可使癌组织及其外周血中中性粒细胞ox-mtDNA表达升高。提示临床可采用检测外周血ox-mtDNA早期诊断口腔癌。