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背景及研究目的:鼻咽癌是一种起源于鼻咽部上皮细胞的恶性肿瘤,在我国南方及东南亚地区高发。CD47作为新晋的免疫检查点分子,可作为细胞的“自我”标识,释放出“别吃我”信号,阻止巨噬细胞的吞噬作用。肿瘤中CD47的高表达抑制了机体的免疫应答,使肿瘤免于被免疫系统清除,从而发生免疫逃逸,而阻断CD47可以在固有免疫及适应性免疫两方面活化免疫系统。MicroRNA是一类内源的非编码的单链RNA,起到调控基因表达的作用。研究表明,MicroRNA可以通过调控免疫系统中的关键基因来精准的调控免疫网络。miR-200a是重要的抑癌因子,在包含鼻咽癌的多种恶性肿瘤中表达下调。通过生物信息学预测发现miR-200a的种子区序列与CD47 mRNA的3’UTR完全互补。说明CD47很可能是miR-200a的靶基因,受miR-200a负向调控。据此我们提出研究假说:CD47是肿瘤关键免疫检查点,miR-200a作为抑癌基因在鼻咽癌中表达失调,使鼻咽癌CD47上调,形成miR-200a/CD47表达失衡,促进鼻咽癌发生“免疫逃逸”,并且miR-200a/CD47表达失衡是鼻咽癌复发的重要原因和免疫治疗的关键靶点。材料与方法:收集南方医科大学南方医院经病理确诊的初诊鼻咽癌共40例组织标本,分别通过原位杂交及免疫组化检测miR-200a/CD47的表达情况。同时检测鼻咽癌细胞株中的表达水平,并运用生物信息学预测靶基因及双荧光素酶报告系统对miR-200a与CD47关系进行验证。然后通过细胞功能学实验检测miR-200a/CD47与增殖、迁移、侵袭、凋亡的关系。最后通过吞噬实验证明抗CD47抗体在鼻咽癌中的作用以及miR-200a可否通过抑制CD47促进吞噬作用。结果:1.鼻咽癌细胞株中miR-200a下调,CD47的表达增加qPCR检测miR-200a在5种鼻咽癌细胞株的表达发现,与NP69相比miR-200a表达下降,而CD47蛋白呈高表达。2.鼻咽癌组织中miR-200a/CD47表达失衡,且二者呈负相关鼻咽癌组织中miR-200a表达明显低于鼻咽炎组织,与TNM分期中的T、N分期相关,spearman相关性分析显示miR-200a的表达与CD47呈负相关(r=-0.435,P<0.01)3.CD47是miR-200a的靶基因生物信息学预测miR-200a的靶基因为CD47,通过构建双荧光素酶报告基因实验表明,在转染报告基因psicheck2-WT(含CD47 3’ UTR)的细胞中上调miR-200a的表达可以有效抑制荧光素酶表达活性(P<0.05),而在psicheck2-MUT中则无法调控,证明CD47为miR-200a的靶基因。4.miR-200a/CD47表达失衡促进细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭通过转染miRNAs进行细胞功能实验表明,miR-200a可以促进细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。而通过转染siRNA干扰CD47表达显示可以逆转miR-200a inhibitor的作用(P<0.05),表明miR-200a促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭的作用,部分是通过对CD47表达的调节实现的。5.纠正miR-200a/CD47失衡促进巨噬细胞吞噬鼻咽癌细胞为了进一步明确抗CD47抗体是否能够特异性的作用于肿瘤细胞促进巨噬细胞的吞噬作用,我们进行了体外巨噬细胞吞噬试验。结果显示,与对照组相比,抗CD47抗体可明显促进巨噬细胞对鼻咽癌CNE1细胞的吞噬作用(P<0.05)。为了进一步明确纠正miR-200a/CD47失衡对巨噬细胞吞噬鼻咽癌细胞的影响,我们将过表达miR-200a的CNE1与巨噬细胞共培养。结果显示,与对照组相比,过表达miR-200a可明显增加巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用,差异有统计学意义(P<0.05)。表明miR-200a可通过抑制CD47的表达,并促进巨噬细胞的吞噬作用。结论:鼻咽癌细胞中miR-200a/CD47表达失衡,通过影响肿瘤细胞的增殖凋亡和转移,抑制巨噬细胞吞噬,在鼻咽癌发生发展和免疫逃逸中发挥重要作用。