【摘 要】
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小麦是我国最重要的粮食作物之一,赤霉病是对小麦威胁最大的真菌病害。本研究以郑麦9023和扬麦158为受体材料,利用基因枪介导法将细菌脱毒基因,RNAi片段等共转化小麦,通过Pmi/甘露糖的筛选体系分化筛选,获得转基因小麦37份;选取部分转基因株系,单花接种的赤霉病抗性鉴定表明,转基因可显著提高小麦的赤霉病抗性。1.转脱毒基因小麦的筛选与赤霉病抗性鉴定（1）将脱毒基因UbiN-AKR13B2和Ubi
【基金项目】
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抗赤霉病转基因小麦新品系培育专项（2016ZX08002001-003）；
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小麦是我国最重要的粮食作物之一,赤霉病是对小麦威胁最大的真菌病害。本研究以郑麦9023和扬麦158为受体材料,利用基因枪介导法将细菌脱毒基因,RNAi片段等共转化小麦,通过Pmi/甘露糖的筛选体系分化筛选,获得转基因小麦37份;选取部分转基因株系,单花接种的赤霉病抗性鉴定表明,转基因可显著提高小麦的赤霉病抗性。1.转脱毒基因小麦的筛选与赤霉病抗性鉴定（1）将脱毒基因UbiN-AKR13B2和UbiN-PQQ-ADH共转化郑麦9023获得3个LZE株系,T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高51%;将脱毒基因UbiN-AKR13B2和UbiN-AKR18A1共转化扬麦158获得5个LYP株系,RT-PCR结果显示AKR13B2和AKR18A1均可表达,T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高35%～58%;转脱毒基因UbiN-AKR13B2、UbiN-AKR18A1的3个XE株系T3～T4代的赤霉病抗性比对照提高31%～44%。（2）转脱毒基因UbiN-AKR13B2、UbiN-AKR18A1、UbiN-PQQ-ADH的YH株系T4～T5代的赤霉病抗性比对照提高29%～38%,HY株系T3～T4代的赤霉病抗性比对照提高25%～47%。（3）通过在含DON的培养基中进行种子萌发及生长实验,鉴定转脱毒基因小麦的毒素耐受力,结果表明转脱毒基因小麦LYP株系T2代、XE株系T4代、YH株系T4代、HY株系T3代的DON毒素耐受力都显著高于对照。2.转RNAi片段及抗体融合蛋白和抗菌肽小麦的筛选与赤霉病抗性鉴定（1）将RNAi片段UbiN-As5-t RNA-As2c和抗菌肽基因组合的最小表达框[Cmps-D4e-Ocs]-[Ubi-Opt-Nos]-[lem1-AFP-Mas]共转化扬麦158获得2个LYB株系,T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高30%～45%。（2）将RNAi片段UbiN-Tri5AS-（R-intron）、UbiN-Tri6AS-（R-intron）-t RNA-Tri10As-（PDK）共转化扬麦158获得8个LYC株系,T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高21%～38%。（3）将RNAi片段Cmps-Tri10As-（PDK）、UbiN-Tri6AS-（R-intron）-t RNA-Tri5As-（R-intron）和抗菌肽基因组合的最小表达框[35s N-ACE1-NOS]-[UbiN-AFP1-G7]共转化扬麦158和郑麦9023,获得5个郑麦受体的LZF株系和3个扬麦受体LYG株系;LZF株系T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高30%～51%;LYG株系T2～T3代的赤霉病抗性比对照提高44%～60%。（4）将RNAi片段UbiN-As5-t RNA-As2c和抗菌肽基因组合的最小表达框[35s N-ACE1-NOS]-[UbiN-AFP1-G7]、lem2-Ex Hvrip共转化扬麦158,筛选获得4个LYI株系,T2代的赤霉病抗性比对照提高23%～46%。（5）将RNAi片段UbiN-As5-t RNA-As2c和抗菌肽基因组合的最小表达框[35s N-ACE1-NOS]-[UbiN-AFP1-G7]、lem2-Ex Hvrip以及抗体融合蛋白lem2-ech42-D2共转化扬麦158,获得7个LYJ株系,T2代的赤霉病抗性比对照提高51%～54%。
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