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摘要：目的：通过动物实验，观察肾炎宁对IgA肾病（IgAN）大鼠肾脏病理学改变的影响，探讨该方对IgAN的治疗效果及对IgA肾病大鼠肾脏转化生长因子TGF-β1的影响。
方法：将30只健康雄性SD大鼠，按体重随机分为3组，每组10只，分别为正常组（Normol Group）、模型组（Model Group）和肾炎宁（Syn Group）组。分别在光镜观察大鼠肾小球的变化，免疫荧光观察IgA沉积情况，免疫组化及聚合酶链反应（PCR）对肾组织中TGF-β1进行半定量分析。
结果：与正常组相比，模型组和肾炎宁组表达明显升高（P<0.05），而与模型组比较，肾炎宁组大鼠肾组织TGF-β1表达则明显降低（P<0.05）。
关键词：IgA肾病肾炎宁动物实验肾组织TGF-β1蛋白
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.05.018
【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801（2014）05-0016-01
IgA肾病又称Berger病，是指肾小球系膜区以IgA或IgA沉积为主的一种原发性肾小球肾炎，临床表现以血尿为主，伴或不伴有蛋白尿，是我国常见的肾小球疾病之一，也是终末期肾衰的主要原因之一。本研究通过肾炎宁对大鼠肾组织TGF-β1表达的影响，探讨其对肾脏的保护机制。
1实验材料
1.1实验动物。健康雄性SD大鼠30只，清洁级，体重130g±10g，由河北医科大学动物实验中心提供
1.2饲养环境。30只大鼠置于安静的空调房内饲养，室温保持在18-23℃之间，相对制度保持在45%-55%之间，分装到6只饲养笼中，每日更换垫料，开窗通风。
1.3实验药物。受试药物：中药（黄芪、生地黄、党参、茯苓、白术、白茅根、女贞子、墨旱莲、川芎、三七粉、仙鹤草、甘草），由河北省中医院提供，药物水煎浓缩至含生药3.9g/ml，放入瓶中密闭4℃存放备用，18.7g/kg·d灌胃。
1.4主要试剂。牛血清白蛋白葡萄球菌，异丙醇，琼脂糖，反转录试剂合，PCR扩增试剂盒，异硫氰酸（FITC）标记羊抗大鼠IgA抗体兔抗鼠多克隆TGF-β1抗体，兔抗鼠多克隆Smad2抗体等。
1.5主要仪器。匀浆器，Sartorius电子天平，DK-600A电热恒温水浴箱，GBOX CHEO-X716凝胶成像系统，TGL-16G-A高速台式冷冻离心机，水平电泳槽，DYY-12型电脑三恒多用电泳仪，冰冻切片机，荧光显微镜，医学图像定量分析系统等。
2方法
2.1动物分组。适应性喂养动物1周后用代谢笼留取尿液，用试纸条检测尿蛋白、尿潜血均为阴性，根据体重排序，随机分为3组：正常组10只、模型组10只、肾炎宁组10只。
2.2模型制备。
2.2.1酸化水的制备。新鲜的双蒸水中加入盐酸，浓度为8.5mmol/L。即1000ml双蒸水中加入10%盐酸3.2ml。1%BSA酸化水的制备，1g BSA加入1000ml酸化水。4℃保存备用。
2.2.21% BSA缓冲液的制备。将1gBSA溶于100ml生理盐水中。现用现配。
2.2.3造模方法。除正常对照组小鼠自由饮食水外，其余两组均在其基础上隔日口服含0.1% BSA的酸化水6周，6周后按10mg/Kg每日1次定期尾静脉注射1%BSA缓冲液，每周连续3天，于第8周按0.4mg/kg，每周1次，连续3周，复加尾静脉注射SEB。正常组口服及注射同等量生理盐水，于16周末处死动物。
2.3治疗方法。于造模第9周开始给药，每日一次，肾炎宁组给予中药煎剂18.7g/kg、d灌胃，正常组和模型组给予相当剂量的生理盐水灌胃，各组共给药8周。
3结果
3.1大鼠的一般情况30只大鼠结束后未见死亡。正常组大鼠饮食正常，反应敏捷，被毛有光泽，体态充盈。其余两组在口服BAS缓冲液期间饮食、外观都与正常组大鼠无差别。尾静脉注射BAS后，两组大鼠出现倦怠，嗜睡，食欲减退等症状，3天后上述症状好转。尾静脉注射SEB后，模型组大鼠精神萎靡，少动抱团，1周以后症状改善。对大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其基因表达的影响
3.2免疫组化染色显示：TGF-β1在肾小球上皮细胞及系膜区呈弱阳性表达，半定量分析结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组的表达要明显加强（P<0.05），与模型组比较，肾炎宁组的表达要明显降低（P<0.05）。
RT-PCR结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组表达明显升高（P<0.05），而与模型组比较，肾炎宁组大鼠肾组织TGF-β1表达则明显降低（P<0.05）。
4讨论
IgA的血清含量增加及其IgA1- O型糖位点基化异常是IgAN的主要诱因，多种细胞因子参与了其发病过程，且细胞因子之间相互作用加剧了疾病的发展，基因的多态性与IgAN的发病和进展有着密切的关系。现阶段，IgAN的确诊不是很明确，治疗也不是很成功，根本原因在于IgAN的发病机制不清楚。但我们相信，随着科学技术的发展和人类对于疾病认识深入，IgAN的发病机制会被进一步阐明。
综上所述，以“益气养阴、活血通络”为大法的肾炎宁能改善IgAN大鼠的一般情况，能明显降低IgAN大鼠肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达，提示该药可能通过降低肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达而达到保护肾功能的作用。
参考文献
[1]刘宏伟，卢影，李彩熙，等.滋肾止血片对实验性IgA肾病小鼠肾组织氧自由基的影响[J]中国中医基础医学杂志，1996，（6）：24
[2]谢院生，陈香美.扁桃体与IgA肾病的发病和治疗[J].中华肾脏病杂志，2004，20（4）： 300-302
[3]张永鹏，申宝娜，刘宏伟.中医药治疗IgA肾病探析[J].河南中医，2000，20（6）：28-29
[4]余凌，李惊子，王海燕.黄芪当归在肾脏疾病中的应用及其机制研究进展[J].中国中西医结合杂志，2001，21（5）：396
方法：将30只健康雄性SD大鼠，按体重随机分为3组，每组10只，分别为正常组（Normol Group）、模型组（Model Group）和肾炎宁（Syn Group）组。分别在光镜观察大鼠肾小球的变化，免疫荧光观察IgA沉积情况，免疫组化及聚合酶链反应（PCR）对肾组织中TGF-β1进行半定量分析。
结果：与正常组相比，模型组和肾炎宁组表达明显升高（P<0.05），而与模型组比较，肾炎宁组大鼠肾组织TGF-β1表达则明显降低（P<0.05）。
关键词：IgA肾病肾炎宁动物实验肾组织TGF-β1蛋白
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.05.018
【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801（2014）05-0016-01
IgA肾病又称Berger病，是指肾小球系膜区以IgA或IgA沉积为主的一种原发性肾小球肾炎，临床表现以血尿为主，伴或不伴有蛋白尿，是我国常见的肾小球疾病之一，也是终末期肾衰的主要原因之一。本研究通过肾炎宁对大鼠肾组织TGF-β1表达的影响，探讨其对肾脏的保护机制。
1实验材料
1.1实验动物。健康雄性SD大鼠30只，清洁级，体重130g±10g，由河北医科大学动物实验中心提供
1.2饲养环境。30只大鼠置于安静的空调房内饲养，室温保持在18-23℃之间，相对制度保持在45%-55%之间，分装到6只饲养笼中，每日更换垫料，开窗通风。
1.3实验药物。受试药物：中药（黄芪、生地黄、党参、茯苓、白术、白茅根、女贞子、墨旱莲、川芎、三七粉、仙鹤草、甘草），由河北省中医院提供，药物水煎浓缩至含生药3.9g/ml，放入瓶中密闭4℃存放备用，18.7g/kg·d灌胃。
1.4主要试剂。牛血清白蛋白葡萄球菌，异丙醇，琼脂糖，反转录试剂合，PCR扩增试剂盒，异硫氰酸（FITC）标记羊抗大鼠IgA抗体兔抗鼠多克隆TGF-β1抗体，兔抗鼠多克隆Smad2抗体等。
1.5主要仪器。匀浆器，Sartorius电子天平，DK-600A电热恒温水浴箱，GBOX CHEO-X716凝胶成像系统，TGL-16G-A高速台式冷冻离心机，水平电泳槽，DYY-12型电脑三恒多用电泳仪，冰冻切片机，荧光显微镜，医学图像定量分析系统等。
2方法
2.1动物分组。适应性喂养动物1周后用代谢笼留取尿液，用试纸条检测尿蛋白、尿潜血均为阴性，根据体重排序，随机分为3组：正常组10只、模型组10只、肾炎宁组10只。
2.2模型制备。
2.2.1酸化水的制备。新鲜的双蒸水中加入盐酸，浓度为8.5mmol/L。即1000ml双蒸水中加入10%盐酸3.2ml。1%BSA酸化水的制备，1g BSA加入1000ml酸化水。4℃保存备用。
2.2.21% BSA缓冲液的制备。将1gBSA溶于100ml生理盐水中。现用现配。
2.2.3造模方法。除正常对照组小鼠自由饮食水外，其余两组均在其基础上隔日口服含0.1% BSA的酸化水6周，6周后按10mg/Kg每日1次定期尾静脉注射1%BSA缓冲液，每周连续3天，于第8周按0.4mg/kg，每周1次，连续3周，复加尾静脉注射SEB。正常组口服及注射同等量生理盐水，于16周末处死动物。
2.3治疗方法。于造模第9周开始给药，每日一次，肾炎宁组给予中药煎剂18.7g/kg、d灌胃，正常组和模型组给予相当剂量的生理盐水灌胃，各组共给药8周。
3结果
3.1大鼠的一般情况30只大鼠结束后未见死亡。正常组大鼠饮食正常，反应敏捷，被毛有光泽，体态充盈。其余两组在口服BAS缓冲液期间饮食、外观都与正常组大鼠无差别。尾静脉注射BAS后，两组大鼠出现倦怠，嗜睡，食欲减退等症状，3天后上述症状好转。尾静脉注射SEB后，模型组大鼠精神萎靡，少动抱团，1周以后症状改善。对大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其基因表达的影响
3.2免疫组化染色显示：TGF-β1在肾小球上皮细胞及系膜区呈弱阳性表达，半定量分析结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组的表达要明显加强（P<0.05），与模型组比较，肾炎宁组的表达要明显降低（P<0.05）。
RT-PCR结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组表达明显升高（P<0.05），而与模型组比较，肾炎宁组大鼠肾组织TGF-β1表达则明显降低（P<0.05）。
4讨论
IgA的血清含量增加及其IgA1- O型糖位点基化异常是IgAN的主要诱因，多种细胞因子参与了其发病过程，且细胞因子之间相互作用加剧了疾病的发展，基因的多态性与IgAN的发病和进展有着密切的关系。现阶段，IgAN的确诊不是很明确，治疗也不是很成功，根本原因在于IgAN的发病机制不清楚。但我们相信，随着科学技术的发展和人类对于疾病认识深入，IgAN的发病机制会被进一步阐明。
综上所述，以“益气养阴、活血通络”为大法的肾炎宁能改善IgAN大鼠的一般情况，能明显降低IgAN大鼠肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达，提示该药可能通过降低肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达而达到保护肾功能的作用。
参考文献
[1]刘宏伟，卢影，李彩熙，等.滋肾止血片对实验性IgA肾病小鼠肾组织氧自由基的影响[J]中国中医基础医学杂志，1996，（6）：24
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[3]张永鹏，申宝娜，刘宏伟.中医药治疗IgA肾病探析[J].河南中医，2000，20（6）：28-29
[4]余凌，李惊子，王海燕.黄芪当归在肾脏疾病中的应用及其机制研究进展[J].中国中西医结合杂志，2001，21（5）：396