对于B细胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)的病人，采用联合运用化疗，放疗以及外科手术(极个别病例需要)的治疗方式可以取得较好的疗效。然而有25％的病例会复发，甚至难以进行治疗以至于病情恶化出现死亡。在研究B细胞淋巴瘤生物学特征过程中发现其细胞表面都有CD20抗原表达，事实上CD20也存在与正常成熟的B细胞表面。采用单克隆抗体技术制备出很特异的抗CD20抗体，这种抗体治疗靶点是B细胞淋巴瘤细胞表面的CD20，在治疗过程中不会对其他造血细胞产生损伤作用如T细胞。实践过程中发现对于B细胞淋巴瘤病人CD20确是一个合适的治疗靶点。 转化了质粒pYZcpp3的大肠杆菌16C9能够分泌表达可溶性抗体抗CD20F(ab’)2，此抗体存在于周质腔中而且无须复性即具有正确的三维结构。采用未经优化的摇瓶培养条件抗体片段产量可达2mg/L，扫描分析SDS-PAGE可知其中F(ab’)2的含量为15％。 采用单因素考察法，对接种量、通气量、种子龄、培养基pH值、发酵温度、发酵周期等六项发酵工艺指标进行了考察，建立了摇瓶发酵的培养方法。采用优化后的摇瓶培养参数进行发酵抗体产量从2mg/L提高到3.8mg/L。 参考了优化后摇瓶发酵工艺指标，在NLF19L发酵罐上主要从三个方面(温度，搅拌速度，无机磷的浓度)对高密度发酵方法进行了考察，确立了CD20F(ab’)2高密度培养方法。采用优化的培养条件，在发酵罐上进行高密度培养OD550值达140；每升湿菌菌重200g；抗体的产量每升为241mg，其中F(ab)2片段达19.6％。基本达到了我们的预期目标。 使用亲和层析介质蛋白-G从菌体裂解液中捕获到F(ab’)2和Fab’混合物。为了得到纯度较高的目标产物F(ab’)2，分别试验了凝胶过滤、疏水层析、离子交换层析法。结果表明F(ab’)2纯度分别达到90.5％、89.3％、92.3％，回收率分别为65％、67％、70.2％。确定离子交换是一种载样量大、回收率高、纯度高、同时具有浓缩样品理想分离纯化方法。 F(ab’)2的体外活性实验表明：F(ab’)2可以特异性的与CD20+B淋巴瘤细胞(Raji、Daudi)结合；能竞争性抑制HI47与细胞膜表面CD20分子的结合，在与HI47浓度相同的情况下，F(ab’)2竞争性结合CD20分子的强度大于Fab’；能抑制体外培养的Raji和Daudi细胞的增殖，而且F(ab’)2抑制B淋巴细胞增殖的能力高于Fab’，F(ab’)2对Raji和Daud细胞的IC50(22.8μg/ml、14.6μg/ml)低于Fab’对Raji、Daudi的IC50(45.9μg/ml、39.5μg/ml)。