2'-O-DAM保护基在RNA固相合成中的应用

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随着RNA干扰现象的发现和化学合成的双链小干扰RNA特异性沉默内源性或外源性基因在哺乳动物细胞内的表达。对可适用于基因治疗的化学合成的寡核苷酸序列的需求越来越大。虽然在RNA2'-OH保护基设计上取得了很大的进步而且也有很多新的2'-OH应用到RNA固相合成上,但是还存在着很多的缺点:许多RNA核苷的2'-OH保护基限制了固相合成的RNA序列的合成效率和偶合动力学方面的提高。核苷2'-OH保护基的设计就成为了RNA固相合成研究的焦点。   为了克服这些缺点,在RNA寡核苷酸序列固相合成研究中我们首次引入了2'-O-[[2,2-二甲基-2-(2-硝基苯)-1-乙酰氧基]甲基](DAM)作为保护基的合成策略。实验结果表明DAM固相合成方法完全可以成功地以高偶合效率合成RNA序列。并且2'-O-DAM保护基上的两个甲基和硝基苯基的独特结构使其能够在不论是碱性条件还是酸性条件下都可以保持稳定,同时也完全符合RNA固相合成过程中的其他条件的要求。此外,2'-O-DAM保护基能够在还原铁粉,接近中性的氯化铵溶液(pH=6.6)55℃解热下温和迅速地脱掉保护基。通过RP-HPLC,ESI-MS,Polyacrylamide Gel Electrophoresis(PAGE)的验证和对比,2'-O-DAM RNA序列合成方法优于传统的2'-O-TBDMS的RNA序列合成方法。   我们的实验结果表明2'-O-DAM能够方便,有效和大量地合成所需的RNA序列。这些优点是其在RNA固相合成中有广泛的应用潜力。
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