盐酸小檗碱对人牙周膜细胞生物学活性及大鼠牙周组织IL-1β、TNF-α表达的影响

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjyu2012
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目的:1、研究玻片覆盖法原代培养人牙周膜成纤维细胞的成功率及生物学性状;在此基础上研究盐酸小檗碱对原代培养的人牙周膜细胞生物学活性的影响。2、研究盐酸小檗碱对大鼠实验性牙周炎模型的牙周组织中TNF-α、IL-1β表达的影响。方法:1、利用形态学、免疫组化方法、生长曲线测定来观察玻片覆盖法原代培养人牙周膜成纤维细胞的成功率其生物学特性,并鉴定其来源,在体外培养人牙周膜成纤维细胞的基础上,采用噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法探讨盐酸小檗碱对原代培养的人牙周膜细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。2、在成功建立大鼠实验性牙周炎模型的基础上,实验动物分别灌服盐酸小檗碱后第1、2、3、4周处死(每次每组5只),取牙周组织标本作切片,行常规HE染色,观察牙周组织病理变化状况,并采用免疫组织化学法检测IL-1、TNF-α水平变化。结果:1、玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。2、盐酸小檗碱对牙周膜细胞生长增殖的影响:与对照组比较,作用24小时,盐酸小檗碱组(A,B,C,D组)均能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05),而E组与对照组比较无统计学意义;作用48小时,盐酸小檗碱组(A,B,C组)均能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05),而D、E组与对照组比较无统计学意义:作用72小时,盐酸小檗碱组(B,C组)均能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05),而A、D、E组与对照组比较无统计学意义。而且盐酸小檗碱在10-20 mg/L浓度范围内作用时间最长。3、盐酸小檗碱对牙周膜细胞蛋白含量的影响:盐酸小檗碱组(A,B,C组)细胞培养液中蛋白总含量均明显高于对照组(P<0.05),而盐酸小檗碱组(D,E组)与对照组比较无统计学意义。4、盐酸小檗碱对牙周膜细胞ALP活性的影响:盐酸小檗碱组(B,C组)细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P<0.05),而盐酸小檗碱组(A,D,E组)与对照组比较无统计学意义,5、牙周炎组牙周组织中IL-1β、TNF-α表达明显高于正常组(P<0.05);各时间段牙周炎治疗组牙周组织中IL-1β、TNF-α表达明显低于牙周炎组(P<0.05),但牙周炎治疗组各时间段之间IL-1β、TNF-α表达无明显差异。结论:玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。盐酸小檗碱在一定浓度范围内(10-20mg/L)能提高牙周膜细胞的增殖活性、蛋白合成及ALP活性。大鼠实验性牙周炎模型牙周组织中TNF-α、IL-1β含量较正常对照组明显升高,应用盐酸小檗碱能抑制实验性牙周炎模型牙周组织中TNF-α、IL-1β的表达。根据上述结果证实盐酸小檗碱可促进创伤愈合和组织再生,从而为牙周病临床的合理用药提供科学依据。
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