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目的:肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）是以肺动脉压力升高以及血管中膜增殖重塑、内膜增生为主要特征,从而导致的血管进行性闭塞的一种疾病,其中以早期的肺动脉收缩反应增强及晚期的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖为其主要病理变化,从而导致肺血管结构重建[1]。低氧既可以独立地促进PAH的发生,又或者作为协同危险因素促进PAH的发生与发展,低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）是PAH的一个重要类型。2-甲氧基雌二醇（2-methoxyextradiol,2ME）是雌激素在体内的主要代谢产物,具有抑制细胞增殖、调控细胞周期停滞、诱导细胞凋亡等作用[2],能够降低血管紧张素II诱导的高血压[3],抑制高血压冠状动脉血管重塑[4],抵抗动脉粥样硬化和血管损伤[5],抑制内膜增生等[6]。近年来诸多研究表明,2ME在肺动脉高压中也起到重要保护作用[7-10]。本实验旨在从细胞水平研究2-甲氧基雌二醇对低氧造成人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells,hPASMCs）增殖的影响,并探讨雌激素受体（estrogen receptor,ER）在其中的介导作用。方法:1细胞培养:采用正常hPASMCs进行细胞培养,置于含基础培养基SMCM、2%胎牛血清、0.5%生长因子和0.5%双抗的平滑肌细胞培养基中,每2d换液1次,于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下,以0.25%胰蛋白酶消化进行传代培养,实验所用细胞均处于对数生长期,为第58代细胞。在2ME干预之前,实验细胞被保存在不含FBS的无酚红DMEM培养液培养24h。2细胞干预:应用第58代hPASMCs,首先给予常氧、低氧及不同浓度2ME（0.1、0.5、1、3、5umol/l）干预,细胞分组为常氧组、低氧组、低氧+2ME（0.1umol/l）组、低氧+2ME（0.5umol/l）组、低氧+2ME（1umol/l）组、低氧+2ME（3umol/l）组、低氧+2ME（5umol/l）组,于倒置显微镜下观察细胞增殖,并行MTT实验测定不同干预条件下的细胞增殖情况。之后给予ERα抑制剂（MPP）及ERβ抑制剂（PHTPP）分别预处理正常hPASMCs后,给予最适浓度2ME（5umol/l）并置于三气培养箱内行低氧处理,细胞分组为低氧+2ME（5umol/l）+MPP组、低氧+2ME（5umol/l）+PHTPP组,将细胞再次于倒置显微镜下观察细胞增殖,并行MTT实验测定细胞增殖情况,并采用RT-PCR法测定不同干预条件下hPASMCs中雌激素受体ERα、ERβ及PCNA的m RNA表达水平,采用Western blot法测定不同干预条件下hPASMCs中雌激素受体ERα、ERβ及PCNA的蛋白表达水平。结果:1 MTT法检测2ME对hPASMCs增殖的影响与常氧组比较,低氧明显促进了hPASMCs增殖,而2ME干预后明显抑制了低氧诱导的hPASMCs增殖且呈浓度依赖性。MPP干预后明显抑制了2ME对细胞增殖的抑制作用,PHTPP干预后2ME对细胞增殖的抑制作用无明显改变（见Fig.1、2、3a）;2 hPASMCs中ERα、ERβ、PCNA m RNA表达水平变化常氧组ERαm RNA表达为（3.02±0.07）,ERβm RNA为（3.97±0.08）,PCNA m RNA为（1.08±0.04）,与常氧组相比,低氧组PCNA m RNA（2.56±0.08）表达水平明显升高,同时ERαm RNA水平（1.53±0.18）明显降低,ERβm RNA水平（3.87±0.14）无明显改变;与低氧组相比,2ME（5umol/L）干预后PCNA m RNA表达水平（1.29±0.02）显著下降,同时ERαm RNA水平（2.99±0.04）明显升高,ERβm RNA表达（3.84±0.21）无明显变化。MPP干预后明显减弱了2ME对PCNA m RNA水平的抑制及对ERαm RNA水平的促进作用;PHTPP干预后2ME对PCNA m RNA水平抑制作用无明显改变（见Fig.3b、4a、5a）;3 hPASMCs中ERα、ERβ、PCNA蛋白表达水平变化常氧组ERα蛋白表达为（1.304±0.216）,ERβ蛋白为（1.761±0.333）,PCNA蛋白为（0.465±0.069）,与常氧组相比,低氧组PCNA蛋白表达水平（1.374±0.084）明显升高,同时ERα蛋白水平（0.646±0.067）明显降低,ERβ蛋白水平（1.753±0.210）无明显改变;与低氧组相比,2ME（5umol/L）干预后PCNA蛋白表达水平（0.941±0.053）显著下降,同时ERα蛋白水平（1.150±0.275）明显升高,ERβ蛋白表达水平（1.363±0.409）略有下降。MPP干预后明显减弱了2ME对PCNA蛋白水平的抑制及对ERα蛋白水平的促进作用;PHTPP干预后2ME对PCNA蛋白水平及ERβ蛋白的抑制作用无明显改变（见Fig.3c、4b、5b）。结论:1低氧状态下,2ME促进ERα的表达。2 2ME能通过调节ERα的表达抑制hPASMCs增殖,从而可能通过此途径对低氧性肺动脉高压及肺血管重塑起保护性作用。