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1.研究背景和目的
miRNAs是一类长约20-24nt的单链非编码RNA，在转录后水平负性调控靶基因的稳定性和表达效率。miRNAs的异常表达与肿瘤的发生密切相关，很可能是一类潜在的癌基因或抑癌基因。
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。过去20年里全球乳腺癌发病率增长近一倍，严重危害女性健康。但乳腺癌发生发展的分子机制至今仍不清楚，进一步探索乳腺癌的分子发生机制对提高乳腺癌诊断与治疗水平具有重要意义。
本研究应用荧光定量RT-PCR技术检测miR-21、miR-125b和miR-29a在乳腺癌及其癌旁组织中的表达量。利用统计学方法分析三者与乳腺癌临床病理特征及预后的关系，为发现新的乳腺癌预后指标及进一步研究miRNA在乳腺癌发病机制中的作用打下基础
2.材料和方法
搜集2000年1月至2002年12月间中山大学肿瘤防治中心存档的福尔马林固定石蜡包埋乳腺癌组织113例及其中40例的癌旁组织。所有病例均有完整的临床病理资料及5年以上随访资料。搜集2007年3月至2007年12月间在同一中心的新鲜组织和相应的福尔马林固定石蜡包埋组织32对(包括24例乳腺癌和其中8例的癌旁组织)。全部病例术前均未接受放、化疗，均为乳腺浸润性癌。
Trizol法抽提总RNA；实时定量RT-PCR检测总RNA中miR-21，miR-125b和miR-29a的表达量；应Fishers精确概率检验法、Kaplan-Meier方法和Cox回归分析三者与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。当P＞0.01时符合正态分布；其他检验均为双侧检验，并认定当P＜0.05时具有统计学意义；。应用miRNA靶基因预测软件TargetScan 4.0，PicTar，miRBase和miRanda，预测上述miRNA的靶基因
3.结果
相关分析结果显示石蜡包埋组织与配对新鲜组织提取的总RNA中miR-21的表达量具有相关性R2=0.91(P＜0.001，线性回归)；配对T检验显示miR。21(P＜0.001，t=-4.84，配对T检验)，miR-125b(P＜0.001，t=-6.81，配对T检验)和miR-29a(P=0.004，t=3.33，配对T检验)在乳腺癌与癌旁组织中的表达具有显著性差异；Fishers精确概率法显示miR-21表达异常与乳腺癌患者首诊时的临床分期(P=0.006，Fishers Exact Test)及淋巴结转移(P=0.007，Fishers Exact Testl相关，miR-125b表达异常与首诊时淋巴结转移相关；Cox多重回归分析表明miR-21和miR-125b分别是乳腺癌独立预后指标之一；靶基因预测共筛选出10个miR-21肿瘤相关靶基因，12个miR-125b肿瘤相关靶基因。
4.结论
4.1 石蜡包埋组织与配对新鲜组织中miR-21的量具有相关性，说明应用实时RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中miR-21的表达量的方法真实可靠。
4. 2 与癌旁组织相比，miR-21和miR-29a在乳腺癌组织中的表达显著上调，miR-125b在乳腺癌组织中的表达显著下调，三者者在乳腺癌的发生发展过程中可能分别发挥癌基因或抑癌基因的作用。
4.3 miR-21高表达与乳腺癌患者首诊时的临床分期晚期及淋巴结转移相关，miR-125b低表达与首诊时淋巴结转移相关。
4.4 miR-21和miR-125b可作为潜在的乳腺癌独立预后指标。
4.5 miR-21和miR-125b的作用靶点非常广泛，涉及到癌基因、抑癌基因、信号转导通路基因等。提示两者的表达失调可能导致其靶基因表达异常，进而在乳腺癌的发生发展中起到重要作用。